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應用固相萃取技術時的注意事項

  • 發(fā)布日期:2017-09-19      瀏覽次數(shù):4021
    •    應用固相萃取技術時的注意事項
        1. 盡量慢
        我們在用固相萃取時,面臨的一個問題就是:液體應該以什么速率過柱流出,我的經(jīng)驗是,要想效果好,就要慢,盡量慢。
        對于固相萃取柱中的填料,我們?nèi)绻植糠糯蟮乜?,能夠看到其實它們是有很多的空隙,液體流通的渠道很多,如果流得快,相當比例的待測組分還來不及與填料充分作用就地從通道流失;所以要慢,給它們一個充分作用的機會。
        如何慢呢?一個竅門就是不要用配合抽氣機使用的所謂固相萃取器,而采用再普通不過的重力法。利用重力的作用使液體向下流出。在實驗速度上,重力法遠不如吸力法,但是在實驗效果方面,重力法遠比吸力法優(yōu)勝,用吸力法只能得到譜帶吸附,用重力法卻能得到柱頭吸附,在速度和效果兩者的平衡中,我們還是傾向于優(yōu)先保證好的效果。
        舉例來說,一個3 ml 500mg的C18小柱,如果加甲醇活化,其甲醇全部流至篩板時間約為20 分鐘,而在過樣品液時,25ml的液體zui多2 小時可以流完,而且用重力法如果得當,工作速率不一定比吸力法差很多。因為我們可以充分利用空閑時間,用吸力法必須有人在旁邊守候,而重力法由于不需要用電,可以充分利用午休和晚上時間過柱,液體量大時接個堆疊接頭和延長管即可,安排好實驗步驟,工作效率一樣很高。另外,重力法不需要抽氣機和固相萃取器。
        2. 盡量少
        在固相萃取條件選擇上,有人為了提高提取效率,盡量多加液體,或選擇填料量大的小柱,我覺得大可不必如此。尤其在用重力法時,由于效率高,很多情況下是柱頭吸附,并不是所有的填料都在起作用,填料多了不僅液體流出速度會更慢,而且在洗脫時的擴散會很明顯。
        因此建議,夠用就行,在能保證效率時,填料盡量少,加液也不宜多。
        3. 實驗條件不宜過分細化
        固相萃取從原理上是色譜分離,但是在操作時只把它作為吸附萃取劑使用,由于填料性質(zhì)、松緊常有差異,因此在實際實驗中不必因為追求效果的*化而設計出很復雜的洗脫程序。
        在建立條件中,我們應該盡量多利用現(xiàn)成的資料,盡快地建立起體系,同時要對操作過于復雜的步驟保持警惕性,在實驗效果,實驗速率和易操作性三者中取得平衡點。
        4. 只用一次
        固相萃取柱只用一次。因為從嚴格的意義上來說,很多物質(zhì)的吸附是不可逆的,一次吸附,無法洗脫,影響著下一次吸附,雖然有人做過重復利用的實驗,但是總體來說為了節(jié)省一點經(jīng)費而大大增加了結(jié)果的不可靠性和不確定性,是很不合算的行為。
        因此建議,只用一次。如果想節(jié)省經(jīng)費可以從減少填料量和使用小容積管入手,盡量用堆疊接頭和延長管。
        5. 慎用固相萃取器
        所有的供應商都會在推薦固相萃取柱的同時,推銷固相萃取器,zui簡單的固相萃取器也要幾千,如果貼個進口商標價格更要加幾倍,這樣的價格還不包括抽氣機。但是這樣的配置就是再加上調(diào)速開關,也很難得到好的結(jié)果,主要問題就是把小柱的不平行性放大了。
        建議:實在不適合重力法的才用固相萃取器。
        至于全自動固相萃取器,應該說,現(xiàn)在市面上還沒有比較理想、適合食品檢測的機器,主要問題就是無法解決一批小柱中液面下降不一致的問題,加上價格很昂貴,性價比也自然不高。帶液面測量的也不能對多批量的小柱同時檢測,且有交叉污染的危險。
        目前的全自動固相萃取器基本上是走重力法路線,倒是回避了密封的難題。
        6. 不可忽視傳統(tǒng)的液體萃取
        有些人在初次接觸固相萃取時,總覺得它能取代液體萃取,實際上就象毛細管電泳無法取代液相色譜一樣。固相萃取在某些場合比液體萃取合適,但是在更多情況下,還是傳統(tǒng)的液體萃取更可靠更合適。這一點從目前實驗技術的實際發(fā)展可以得到印證。
        關于液固萃取,我們不要僅僅把它看作是一個提取過程,從另一個角度來看,它還是一個凈化過程,是把固形干擾物排除凈化的過程。理解這一點,有助于我們優(yōu)化選擇實驗方法。
        7. 實用性是實驗設計成功與否的zui終準繩
        在設計一個實驗時,開始要考慮到其技術上是否先進。而在實際運用中,zui終決定這個方法是否可行,是否能夠存在的關鍵是實用性。一個實驗方法不僅要解決問題,而且能夠在人力,物力,財力三方面達到平衡,且滿足可持續(xù)、可重復操作的要求。
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